核酸凝膠染料泡染法的操作方法及注意事項(xiàng)
 

　　泡染法
 

　　(1) 按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
 

　　(2) 用H2O將MKRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。(例如將15μL MKRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
 

　　(3) 將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，zui合適染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5～10%丙烯酰胺的凝膠，染色時(shí)間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng)。
 

　　1、此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
 

　　2、由于MKRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將MKRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。MKRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
 

　　3、如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關(guān)，請(qǐng)嘗試：降低瓊脂糖濃度;選用更長(zhǎng)的凝膠;延長(zhǎng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
 

　　4、此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠，對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
 

　　注意事項(xiàng)：
 

　　1、用泡染法染色時(shí)，染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
 

　　2、3× MKRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。